姊妹染色单体色差方法
实验步骤
1. 在无菌条件下，用20毫升的青霉素瓶分装5毫升培养液，其中RPMI1640占80％；小牛血清占15—20％；PHA0.2毫升；青霉素 100单位/毫升；链霉素100微克/毫升。最后用3.5％NaHCO3调节pH至7.2—7.4。
2. 每5毫升的培养液中加入BrdUrd0.1毫升，最终浓度为10微克/毫升。
3. 每瓶培养液中加入0.3毫升静脉血，轻轻摇匀，用黑布避光，立即置37℃温箱中培养。
4. 培养72小时左右，加入秋水仙素0.4—0.8微克/毫升，继续培养4小时。
5. 按常规收集细胞，用0.075mol/LKCl或蒸馏水低渗20分钟，用甲醇：冰醋酸3：1配制的固定液固定两次，每次15分钟，用气干法制片，一天以后将染色体制片放入70—80℃烤箱中烘烤1—2小时，或放在37℃温箱中存放备用。
6. 染色体标本的差别染色方法有两种：
1) 碱的热溶液处理：将染色体标本浸在88℃的 1mol/LNaH2PO4（pH为8.0）的溶液中，处理20分钟，取出后立即用蒸馏水冲洗，用常规Giemsa染色5分钟，再用蒸馏水冲洗，干燥，观察。
2) 紫外灯照射诱发：染色体标本在37℃条件下搁置24小时后取出，放在45—48℃的水浴锅上，覆盖一层2×SSC溶液（0.3mol/LNaCl，0.03mol/L枸橼酸钠），15W紫外灯照射20—30分钟，灯管与载玻片之间距离为6厘米（照光期间防止2×SSC溶液干涸）。照射完毕，用蒸馏水冲去2×SSC，用3％Giemsa（pH6.8磷酸缓冲液稀释）染色5—10分钟，水洗，气干后镜检。
7. 在普通光学显微镜下观察，可见姊妹染色单体呈现鲜明的深浅不同的颜色。