微生物学报Acta Microbiologica Sinica 48(10)：1330~1338; 4 October 2008
烟曲霉蛋白质分泌载体的构建及酸性磷酸酯酶的细胞定位
陈晓敏，欧阳浩淼，唐国敏，王敖全，金城*
（中国科学院微生物研究所微生物资源国家重点实验室，北京 100101）
摘要：【目的】在酵母细胞中蛋白质的糖基磷酸肌醇化（GPI）修饰是将GPI定位于细胞膜或细胞壁的信号。目前已对酵母GPI蛋白的细胞定位信号有一定了解，但对丝状真菌GPI蛋白的定位则了解甚少。AfPhoA是丝状真菌烟曲霉（Aspergillus fumigatus）的酸性磷酸酯酶，是GPI修饰的蛋白。该蛋白首先分离自细胞膜，随后又发现该蛋白与细胞壁结合。分析其C-端序列也未发现已知的定位信号，因此目前还不能确定其细胞定位。【方法】我们以绿色荧光蛋白（GFP）作为报告分子，将AfPhoA的C-端序列与GFP的C-端融合后检测融合GFP的细胞定位。【结果】我们用烟曲霉几丁质酶AfChiB1的启动子和N-端信号肽构建了可在烟曲霉中分泌表达GFP的表达载体pchiGFP。在此基础上将AfPhoA的C-端与GFP融合，融合质粒与pCDA14共转化烟曲霉后筛选到一株转化子。该转化子可表达融合GFP，在诱导和非诱导条件下，融合GFP均主要分布在细胞膜上，随培养时间的延长，融合GFP在细胞壁上也有少量分布；在培养上清液中只能检出约30KD的GFP融合蛋白，而没有完整的GFP融合蛋白，推测为从GPI锚上水解释放的。【结论】我们的研究结果表明，AfPhoA蛋白GPI修饰的作用是使该蛋白定位于细胞膜。本研究不仅初步确定了AfPhoA蛋白GPI修饰的细胞膜定位功能，而且为烟曲霉基因与蛋白质功能的研究建立了一个有效表达系统。
关键词：烟曲霉；信号；GPI锚；蛋白定位
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