生化分析仪的正确应用,只是掌握了测定技术原理还不够,还需要对具体仪器的工作流程及测定计算方法有足够的了解。
(一)一般工作流程
工作流程可以通过仪器的测定周期来考察。重点关注比色杯空白读数点(CB)、加样品点(S)、各试剂加液点(R1、R2、……)、试剂空白读数点(RB)、各测定读数点(P)、各点时间间隔及周期总时间等。每个仪器一般都在反应转盘的固定位置和反应测定周期的固定时间设置样品试剂和稀释的加液位,以及测定读数点。如HITACHI 7170在P1到P34周期为10分钟时,PO前加样品,Rl在Pl前,R2在P5和P6间,R3在P16和P17间,R4在:P33和P34间。
(二)数据处理计算方法
仪器在各个吸光度读数点读取的吸光度数据,并不一定都纳人浓度计算。仪器往往根据仪器定义和操作者设定的要求,对吸光度原始数据作计算处理,转换成所谓反应数据,再按系数或公式作浓度计算。举例如下:
1.HITACH 7170的终点法测定点(A )吸光度计算为(AX+AX-1)/2。实际吸光度=吸光度数据×10 000。
2.0LYHPUS AU 600试剂空白数据:P0点试剂空白(RB)=P0点吸光度一比色杯水空白(wB);任一测定点试剂空白(RB )。该点吸光度一比色杯水空白(WB)。
3.Monarch 1 000两点终点法的反应数据。(终点测定吸光度一终点空白吸光度)一(始点测定吸光度一始点空白吸光度)。
4.AU 600的终点法(带试剂空白,END法)的反应数据=终点吸光度一P0点吸光度(试剂空白,RB)。终点法(不带试剂空白,END).法)的反应数据=终点吸光度-比色杯水空白(WB)。
5.Au 600的两点法(自身空白)的反应数据=[加第二试剂后测定点读数一P0点读数]一[加第二试剂前测定点读数一PO点读数]。
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