1培养液pH对细胞生长的影响?
答:由于大多数细胞适宜pH为7.2-7.4,偏离此范围可能对细胞生长将产生有害的影响。但各种细胞对pH的要求也不完全相同,原代培养细胞一般对pH变动耐受差,无限细胞系耐受力强。但总体来说,细胞耐酸性比耐碱性强一些。在配制培养用液时,需要注意一点:新配制的培养基在经过0.10um或0.22um滤膜过滤时,溶液的pH还会向上浮动0.2左右。
2培养液pH下降很快可能原因有哪些?其解决办法是什么?
答:通常细胞生长得非常快时,pH值通常下降得很快。此时可以及时传代、提高传代比例或降低血清量等方法进行解决。此外,培养瓶盖拧得太紧、NaHCO3缓冲系统缓冲能力不够、培养液中盐浓度不正确、细菌、酵母或真菌污染等也能导致pH值通常下降得很快。
(1)按培养液中NaHCO3浓度增加或减少培养箱内CO2浓度,2.0g/L到3.7g/L浓度NaHCO3对应CO2浓度为5%到10%。
(2)改用不依赖CO2培养液。
(3)松开瓶盖1/4 圈。加HEPES缓冲液至10到25mM终浓度。
(4)在CO2培养环境中改用基于Earle′s盐配制的培养液,在大气培养环境中培养改用Hanks盐配制的培养液。
(5)如果是污染造成的则丢弃培养物或用抗生素除菌。
3为什么培养的细胞要及时传代?
答:体外培养的细胞大多具有生长接触抑制的特性,也就是说当一个细胞被其他细胞包围的时候,它就会停止生长,及时传代后,细胞的生长得以继续。
4/、Hank′s 平衡盐溶液(HBS)和Earle′s平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别?
答:HBS和EBS的主要差别在于碳酸氢钠的水平,在Eagle′s (2.2g/L)中比在Hanks′ (0.35g/L) 中高。碳酸氢钠需用高水平的CO2平衡,以维持溶液的PH值。Eagle′s液在空气水平的CO2中,溶液会变碱,Hanks′液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织,需要用Eagle′s液。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织,用Hanks′液就可以了。
5培养基中丙酮酸钠的作用是什么?
答:丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源,尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源,但是,如果没有葡萄糖的话,细胞也可以代谢丙酮酸钠。
6/、GlutaMAX-I是什么?培养细胞如何利用GlutaMAX-I?这个二肽有多稳定?
答:GlutaMAX-I 即谷丙氨酸二肽,是一个L-谷氨酰胺的衍生物,其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽,释放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常稳定,即使在121磅灭菌20分钟,GlutaMAX-I二肽溶液有最小的降解,如果在相同条件下,L-谷氨酰胺几乎完全降解。