1欲将一般动物细胞离心下来,其离心速率应为多少转速?
答:欲回收动物细胞,其离心速率一般为300×g(约1,000rpm),5-10分钟,过高之转速过长时间都将造成细胞死亡。合适的离心转速是根据相对离心决定。
2悬浮细胞应如何继代处理?
答:一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养瓶中,稀释细胞浓度即可。若培养液太多时可分瓶取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养瓶中,加入新鲜培养基稀释至适当浓度,重复上述步骤即可。
3冷冻保存细胞之方法?
答:冷冻保存方法一:冷冻管置于4℃(30-60分钟)→–20℃(30分钟) →–80℃(16-18小时或隔夜)→ 液氮罐长期储存。
冷冻保存方法二:冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80℃以下,再放入液氮中长期储存。
4支原体污染会对细胞培养有何影响?
答:支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数、代谢及研究之任一数据。故进行实验前,必须确认细胞为mycoplasma-free,实验结果之数据方有意义。
5购买的细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因?
答:研究人员在细胞培养时出现存活率不佳,原因比较复杂,常见原因可归纳为:培养基使用错误或培养基品质不佳;血清使用错误或血清的品质不佳;解冻过程错误;冷冻细胞解冻后,加以洗涤细胞和离心;悬浮细胞误认为死细胞;培养温度使用错误;细胞置于–80℃太久等。建议严格参照ATCC或ECACC的标准操作规程进行细胞复苏、冻存等工作。
6购买的细胞冷冻管经解冻后,为什么有时会发生细胞数目太少?
答:研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少,大都是因为离心过程操作上的失误,造成细胞的物理性损伤,以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心,应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。但对于DMSO敏感的细胞,还是复苏细胞时,用离心去除DMSO比较好